微生物菌种保藏法律法规

1.微生物菌种怎样进行保藏

传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。

传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

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2.微生物菌种保藏实验的冷冻保藏法的实验步骤是什么

得看你从哪步开始了。

假设是从平板上挑点开始。

以下操作都在无菌环境下。

你在平板上获得了需要的菌落。

1. 挑取1-3个长势较好菌落，用灼烧灭菌的接种环挑取少量菌体，置于含4mL液体培养基的试管中，混匀。

2. 给试管塞好棉塞，震荡混匀菌体，打散菌块。

3. 将试管置于合适温度下摇床中过夜培养。

4. 待菌液浓度合适时，吸取750μL新鲜菌液置于2 mL离心管中，加入250μL灭菌的60%甘油溶液。

5. 将菌种置于-80 ℃保存。

3.微生物菌种对沙土保存法有什么要求

微生物菌种沙土保藏法

是载体保藏法的一种。将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液，注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在沙土载体上，将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4~6℃或室温进行保存的一种菌种保藏方法。

操作步骤如下：

1 沙土管制备

将河沙用60目过筛，弃去大颗粒及杂质，再用80目过筛，去掉细沙。用吸铁石吸去铁质，放入容器中用10%盐酸浸泡，如河沙中有机物较多可用20%盐酸浸泡。24小时后倒去盐酸，用水洗泡数次至中性，将沙子烘干或晒干。

另取地面下40~60cm非耕作层贫瘠且粘性较小的土，研碎，100目过筛，水洗至中性，烘干。

将处理后的沙、土按质量比2∶1混合。混匀的沙土分装入安瓿管或小试管中，高度为1cm左右，塞好棉塞，121℃湿热灭菌30min。

随机抽取灭菌后的砂土管若干支，无菌条件下取少许砂土至营养肉汁培养基中，30℃培养24小时，检查无微生物生长后方可使用。

2 斜面培养物的制备

参照定期移植法。

3 制备菌悬液

向培养好的斜面培养物中注入3~5mL无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。用无菌吸管吸取菌悬液，均匀滴入沙土管中，每管0.2~0.5mL。放线菌和霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。

4 干燥

真空抽去沙土管中水分。

5 保藏

将沙土管用火焰熔封后存放于低温（4~6℃）干燥处保藏，每隔半年检查一次菌种存活性及纯度。或将沙土管直接用牛皮纸或塑料纸包好，置干燥器内保存。

保藏时间2~10年。

6 恢复培养

无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。

4.微生物菌种保藏的方法有哪些

找了半天~给个最佳呗1、低温定期移植保藏法.将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中保藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具体应根据菌种特性决定.保藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内.因此，若用棉塞，可用干净的硫酸纸或牛皮纸包扎棉塞，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥.除草菇菌种外，其他食用菌菌种都能采用此法保藏. 2、液体石蜡保藏法.取化学纯液体石蜡（要求不含水分、不霉变）装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1公斤/平方厘米压力下灭菌1小时，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止.将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28-30℃下培养2-3天，证明无杂菌生长方可使用.然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中.注入量以高出培养基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞，用固体石蜡封口，直立于低温干燥处保藏.保藏时间在一年以上，在低温下，保藏时间还可延长. 3、沙土管保藏法.取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去其中有机物质，再用水冲洗至流水的ph达到中性，烘干备用.同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使呈中性，沉淀后弃去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以（2-4）:1混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2克，塞棉塞，用纸包扎灭菌（1.5公斤/平方厘米，1小时），再干热灭菌（160℃，2-3小时）1-2次，进行无菌检验，合格后使用.将已形成孢子的斜面菌种，在无菌条件下注入无菌水3-5毫升，刮菌苔，制成菌悬液，再用无菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土为止.将接种后的沙土管放入盛有干燥剂的真空干燥器内，接上真空泵抽气数小时，至沙土干燥为止.真空干燥操作需在孢子接入后48小时内完成，以免孢子发芽.制备好的沙土管用石蜡封口，在低温下可保藏2-10年. 4、滤纸片保藏法.取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成4*0.8厘米的小纸条，平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌（1公斤/平方厘米，30分钟）.采用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上.将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，再将保藏试管放入干燥器中1-2天，除去滤纸水分，使滤纸水分含量达2%左右，然后低温保藏. 5、自然基质保藏法 ⑴麦粒保藏法：取无瘪粒、无杂质的小麦淘洗干净，浸泡12-15小时，加水煮沸15分钟，继续热浸15分钟，使麦粒胀而不破，沥干水分摊开晾晒，使麦粒的含水量在25%左右.将碳酸钙、石膏拌入熟麦粒中（麦粒、碳酸钙、石膏比例为10公斤：133克：33克），拌和均匀后装入试管中，每管约2-3克，然后清洗试管，塞棉塞，灭菌1.5(1.5公斤/平方厘米，2小时)，经无菌检查合格后备用，试管基质冷却后接种，适温培养，待菌丝长满基质后用石蜡涂封棉塞，放低温保藏.2年左右转接一次. ⑵麸曲保藏法.取新鲜麸皮，过60目筛除去粗粒.将麸皮和自来水按1:1拌匀，装入小试管，每管约装1/3高度，加棉塞用纸包扎，高压灭菌（1.5公斤/平方厘米，30分钟），经无菌检查合格后备用，将生长在斜面培养基上的健壮菌种，移种至无菌麸曲管中，移种时注意尽管捣匀小试管中的麸皮，呈疏松状态，在适温下培养至菌丝长满麸皮为止，将麸曲小管置干燥器中，在低温或适温下保藏. 6、生理盐水保藏法.取纯氯化钠0.7-0.9克，放入100%毫升蒸馏水中，搅拌均匀分装试管，每管5-10毫升，进行灭菌（1公斤/平方厘米，30分钟），经无菌检查合格后备用，将待保藏的菌种接入马铃薯葡萄糖液体培养基中适温振荡培养5-7天.无菌操作吸取少许培养菌种注入经检验合格的生理盐水试管中，塞上无菌橡皮塞，用石蜡涂封，在室温或低温保藏. 7、冷冻真空干燥法.将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于灭菌的血清、卵白、脱脂奶制成菌悬液，将悬液以无菌操作分装于灭菌的玻璃安瓿瓶中，每管约0.3-0.5毫升，然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接，安瓿瓶放在冷冻槽中于-30℃至-40℃迅速冷冻，并在冷冻状态下抽空干燥，并在真空状态下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本较高. 8、液氮超低温保藏法.首先将要保藏的菌种制成菌悬液备用；其次，准备安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷冻保护剂10%（体积比）甘油蒸馏水溶液，塞棉塞灭菌（1公斤/平方厘米，5分钟）.无菌检查后，接入要保藏的菌种，火焰熔封瓶口，检查是否漏气，将封好口的安瓿瓶放在冻结器内，以每分钟下降1℃的速度缓慢降温，使保藏品逐步均匀地冻结，直至-35℃，以后冻结速度就不需控制，安瓿冻结后立即放入液氮罐内，在-150至-196℃保藏，该法只有少数科研院所使用.。

5.什么是菌种的载体保藏法

将药用真菌孢子附着在某种基物上进行干燥，然后加以保藏。

其原理是利用菌孢子具有较厚的细菌壁，对干燥环境有很强的抵抗能力，干燥保存后的孢子遇到适宜的条件，还能萌发生长的特性而 进行保藏。因附着的载体种类很多，方法也不完全相同。

（1） 砂管保藏法该法是药用真菌孢子保藏在干燥的无菌砂土 中.保藏用的砂土需先处理，应不含有机质及有害物质、PH值近中性、砂和土有一定的比例和细度，保藏用的砂土要无菌。（2） 滤纸保藏法以滤纸条为保藏基质，使药用真菌孢子吸附 在滤纸条上，然后装人安瓿瓶或试管内，密封后保存于低温处。

这种方法保藏时间长，菌种不易退化，可以保存数年，制作方法简单。